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    實驗技術交流

    如何做好病毒空斑實驗

    文字:[大][中][小] 手機頁面二維碼 2018/9/18     瀏覽次數:    

      如何做好病毒空斑實驗?

      以乙型腦炎病毒感染BHK-21細胞為例


      第一步:溶液配制

      1、2%羧甲基纖維素納覆蓋培養基:先取4g粉狀羧甲基纖維素納溶入100ml蒸餾水,高溫高壓滅菌,再放入冰箱。使用前無菌操作按1:1比例加入2倍DMEM培養基(含有2%FBS和1%雙抗),混勻放入冰箱,過一天后再拿出,反復搖勻,使纖維素達到一種勻質的狀態,靜置至泡沫完全消失后使用。

      2、結晶紫:取0.34g粉劑加到15ml 95% 醫用酒精中,溶解后再用蒸餾水定溶到100ml。


      第二步:空斑實驗

      1、BHK-21細胞培養;

      2、對BHK-21細胞進行計數,按一定比例接入24孔板;

      3、24h后,棄培養液,用PBS洗兩次;

      4、接種乙型腦炎病毒:接種病毒液0.1ml/孔,病毒液按10倍梯度稀釋,可以做重復;

      5、放入37度5%CO2培養箱1h,期間每15min慢搖一次,使病毒充分吸附;

      6、棄病毒液,用PBS洗滌細胞三次。加入2%羧甲基纖維素納覆蓋培養基(1ml/孔),放入37度5%CO2培養箱繼續培養;

      7、3天后,吸棄培養基;

      8、加入5%甲醛1ml/孔固定4min,棄甲醛,加入結晶紫0.8ml/孔染色20min;

      9、蒸餾水緩緩沖洗染液,計算空斑數。


      注意事項:2%羧甲基纖維素納覆蓋培養基在配制過程中一定要充分搖勻;病毒吸附后一定要洗滌,以防后期空斑數不準確;接毒后的細胞培養時間不同病毒會有不同,按實際情況來處理;避免多次觀察細胞培養板,會很容易造成病毒移位,空斑變大。

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