• <optgroup id="kce24"><samp id="kce24"></samp></optgroup>
  • <sup id="kce24"></sup>
  • 今天是2021年10月11日 星期一,歡迎光臨本站 

    慢病毒包裝

    慢病毒包裝試劑盒

    文字:[大][中][小] 手機頁面二維碼 2019/3/27     瀏覽次數:    

    產品簡介
    知恩生物慢病毒包裝試劑盒為您的病毒包裝進行一站式服務,讓初學者也能快速包裝優質的慢病毒(適用于HIV系統慢病毒)。試劑盒包含全套包裝質粒、轉染試劑、病毒感染增強劑及穩定細胞株構建所用的嘌呤霉素。適用于基因過表達和干擾慢病毒的包裝,以及后續穩定細胞株的構建。

    客戶只需構建帶有目的基因的過表達或干擾質粒,再將其和試劑盒中的包裝質粒Lentiviral Mix按1:1混合,用ZNHi Transfection Reagent將混合后的質粒轉染293T細胞,24h就能看到熒光,48h就能收毒,利用慢病毒濃縮液能快速濃縮純化病毒,為后續的感染實驗提供高純度高滴度的病毒。

    知恩生物腺相關病毒產品發表文章(影響因子10.658)DOI: https://doi.org/10.1016/j.pneurobio.2020.101790


    產品信息
    產品名稱 產品編號 規格 儲存 價格(元)
    Lentiviral Packaging Kit 慢病毒包裝試劑盒
    ZNLP-001-20
    20T 4℃/-20℃
    3088.00
    Lentiviral Packaging Kit 慢病毒包裝試劑盒
    ZNLP-001-40
    40T 4℃/-20℃
    5288.00

    產品組分

    組分編號 組分名稱 儲存 產品編號/規格
    ZNLP-001-2020T
    ZNLP-001-4040T
    ZNLP-001-A
    Lentiviral Mix
    -20℃
    240μl
    480μl
    ZNLP-001-B
    ZNHi Transfection Reagent
    -20℃
    1.2 ml
    2×1.2 ml
    ZNLP-001-C
    EGFP對照質粒(Amp+
    -20℃
    5μg
    5μg
    ZNLP-001-D
    病毒感染增強劑(8mg/ml)
    -20℃
    100μl
    100μl

    運輸與保存方法
    冰袋運輸。組分均于-20℃保存。

    慢病毒包裝所需其他材料(自行準備或選用本公司產品)
    1)HEK 293T:慢病毒包裝工具細胞(cat#ZNLP-002)

    2)FBS:特級胎牛血清FBS(cat#ZNLP-003)

    3)慢病毒濃縮液(5×):cat#ZNLP-004

    4)嘌呤霉素(1mg/ml):cat#ZNLP-005


    質粒準備
    慢病毒骨架質粒構建與大提:構建含目的基因或shRNA的骨架質粒(HIV系統),并進行大提獲得足夠質量的無內毒素質粒,且所提質粒DNA 的A260/A280在1.8~2.0之間,濃度大于0.5μg/μl。

    細胞狀態:選擇狀態良好的293T細胞進行病毒包裝,盡量選擇低代數細胞。


    實驗流程
    1)293T細胞準備:轉染前一天,將已經狀態良好的293T細胞以合適比例接種到10cm培養皿中,當細胞長到80%左右時準備轉染;
    2)轉染:轉染前視細胞狀態和密度決定是否提前換液。取兩個無酶無菌的1.5ml EP管,在A、B管中先都加入500μl Opti-MEM,然后再分別加入質粒和轉染試劑,詳細內容參考下表:

    組分
    體積
    Opti-MEM(A管)
    500μl
    骨架質粒DNA+Lentiviral Mix(A管)
    12μg+12μl(10μg)
    Opti-MEM(B管)
    500μl
    ZNHi Transfection Reagent(B管)
    60μl

    將B管轉染試劑混合液加到A管中,輕輕混勻后,室溫放置15min~20min后,再將AB管混合液加到細胞中,置于CO2培養箱繼續培養;
    3)換液:轉染過液后,小心棄掉細胞上清(注意收集上清后需要滅菌處理),然后加入10ml新鮮的培養基(培養基血清濃度按細胞密度來調整,一般建議1%-5%)繼續培養;
    4)病毒收集:換液36-48h后,吸取細胞上清液于50ml離心管,4℃保存,再重新加入10ml新鮮的培養基,24h后再收集一次細胞上清于第一次的離心管中;
    5)病毒處理:4℃,4000rpm離心10min收集上清液,并用用0.45μm濾器過濾后轉移到新的離心管中。對病毒進行分裝保存,可以直接用于下游實驗。如果對病毒的滴度及純度有較高要求,可用本公司的慢病毒濃縮液(cat#ZNLP-004)對病毒原液進行濃縮與純化。也可以使用超濾管超濾實現病毒的濃縮;
    6)病毒濃縮:使用本公司的慢病毒濃縮液(cat#ZNLP-004)進行病毒的濃縮,按病毒原液的1/4體積加入病毒濃縮液,混勻后4℃過夜(每20~30min混合一次,共進行3-5次)。第二天,4℃,4000rpm,離心 20min,吸棄上清后靜置管子1~2分鐘,吸走殘余液體,再加入適量的PBS或培養基溶解慢病毒沉淀;超濾選擇100KD大小的超濾管,4000-6000rpm,4℃離心。

    7)病毒分裝與保存:將病毒原液或濃縮液按合適體積進行分裝,再保存于-80℃。


    注意事項

    1、構建穩定細胞株時,可用病毒感染增強劑和嘌呤霉素(cat#ZNLP-005)對細胞進行感染和篩選。

    2、為了您的健康,實驗操作過程盡量在生物安全柜中完成,并做好個人防護,請穿實驗服和帶一次性手套。所有實驗廢棄物均需要進行滅菌處理。

    3、小量病毒包裝時,也可以使用小提質粒。轉染時如無opti-MEM,可以用PBS、生理鹽水或無血清DMEM代替。


    慢病毒包裝步驟流程圖



    聯系我們

    合肥知恩生物技術有限公司

    電話:0551-63822150/86-18949874361

    郵箱:zhienbiology@126.com

    地址:合肥市蜀山區黃山路602號國家大學科技園A座502-504室

    返回上一步
    打印此頁
    +86 189-4987-4361
    0551-63822150
    掃碼添加微信
    微信二維碼
    成人有色视频免费观看网址,最新国产一卡二卡三卡四卡,天堂www天堂网在线最新版,yy111111电影院少妇影院 <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <文本链> <文本链> <文本链> <文本链> <文本链> <文本链>