生物實驗室
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慢病毒包裝
產品簡介
知恩生物慢病毒包裝試劑盒為您的病毒包裝進行一站式服務，讓初學者也能快速包裝優質的慢病毒（適用于HIV系統慢病毒）。試劑盒包含全套包裝質粒、轉染試劑、病毒感染增強劑及穩定細胞株構建所用的嘌呤霉素。適用于基因過表達和干擾慢病毒的包裝，以及后續穩定細胞株的構建。
客戶只需構建帶有目的基因的過表達或干擾質粒，再將其和試劑盒中的包裝質粒Lentiviral Mix按1：1混合，用ZNHi Transfection Reagent將混合后的質粒轉染293T細胞，24h就能看到熒光，48h就能收毒，利用慢病毒濃縮液能快速濃縮純化病毒，為后續的感染實驗提供高純度高滴度的病毒。
知恩生物腺相關病毒產品發表文章（影響因子10.658）DOI: https://doi.org/10.1016/j.pneurobio.2020.101790
產品信息
| 產品名稱 | 產品編號 | 規格 | 儲存 | 價格（元） |
|
Lentiviral Packaging Kit 慢病毒包裝試劑盒 |
ZNLP-001-20 |
20T |
4℃/-20℃ |
3088.00 |
|
Lentiviral Packaging Kit 慢病毒包裝試劑盒 |
ZNLP-001-40 |
40T |
4℃/-20℃ |
5288.00 |
產品組分
| 組分編號 | 組分名稱 | 儲存 |
產品編號/規格 |
|
|
ZNLP-001-20（20T） |
ZNLP-001-40（40T） |
|||
|
ZNLP-001-A |
Lentiviral Mix |
-20℃ |
240μl |
480μl |
|
ZNLP-001-B |
ZNHi Transfection Reagent |
-20℃ |
1.2 ml |
2×1.2 ml |
|
ZNLP-001-C |
EGFP對照質粒（Amp+） |
-20℃ |
5μg |
5μg |
|
ZNLP-001-D |
病毒感染增強劑（8mg/ml） |
-20℃ |
100μl |
100μl |
運輸與保存方法
冰袋運輸。組分均于-20℃保存。
慢病毒包裝所需其他材料（自行準備或選用本公司產品）
1）HEK 293T：慢病毒包裝工具細胞（cat#ZNLP-002）
2）FBS：特級胎牛血清FBS（cat#ZNLP-003）
3）慢病毒濃縮液（5×）：cat#ZNLP-004
4）嘌呤霉素（1mg/ml）：cat#ZNLP-005
質粒準備
慢病毒骨架質粒構建與大提：構建含目的基因或shRNA的骨架質粒（HIV系統），并進行大提獲得足夠質量的無內毒素質粒，且所提質粒DNA 的A260/A280在1.8～2.0之間，濃度大于0.5μg/μl。
細胞狀態：選擇狀態良好的293T細胞進行病毒包裝，盡量選擇低代數細胞。
1）293T細胞準備：轉染前一天，將已經狀態良好的293T細胞以合適比例接種到10cm培養皿中，當細胞長到80%左右時準備轉染；
2）轉染：轉染前視細胞狀態和密度決定是否提前換液。取兩個無酶無菌的1.5ml EP管，在A、B管中先都加入500μl Opti-MEM，然后再分別加入質粒和轉染試劑，詳細內容參考下表：
|
組分 |
體積 |
|
Opti-MEM（A管） |
500μl |
|
骨架質粒DNA+Lentiviral Mix（A管） |
12μg+12μl(10μg) |
|
Opti-MEM（B管） |
500μl |
|
ZNHi Transfection Reagent（B管） |
60μl |
將B管轉染試劑混合液加到A管中，輕輕混勻后，室溫放置15min~20min后，再將AB管混合液加到細胞中，置于CO2培養箱繼續培養；
3）換液：轉染過液后，小心棄掉細胞上清（注意收集上清后需要滅菌處理），然后加入10ml新鮮的培養基（培養基血清濃度按細胞密度來調整，一般建議1%-5%）繼續培養；
4）病毒收集：換液36-48h后，吸取細胞上清液于50ml離心管，4℃保存，再重新加入10ml新鮮的培養基，24h后再收集一次細胞上清于第一次的離心管中；
5）病毒處理：4℃，4000rpm離心10min收集上清液，并用用0.45μm濾器過濾后轉移到新的離心管中。對病毒進行分裝保存，可以直接用于下游實驗。如果對病毒的滴度及純度有較高要求，可用本公司的慢病毒濃縮液（cat#ZNLP-004）對病毒原液進行濃縮與純化。也可以使用超濾管超濾實現病毒的濃縮；
6）病毒濃縮：使用本公司的慢病毒濃縮液（cat#ZNLP-004）進行病毒的濃縮，按病毒原液的1/4體積加入病毒濃縮液，混勻后4℃過夜（每20～30min混合一次，共進行3-5次）。第二天，4℃，4000rpm，離心 20min，吸棄上清后靜置管子1～2分鐘，吸走殘余液體，再加入適量的PBS或培養基溶解慢病毒沉淀；超濾選擇100KD大小的超濾管，4000-6000rpm，4℃離心。
7）病毒分裝與保存：將病毒原液或濃縮液按合適體積進行分裝，再保存于-80℃。
注意事項
1、構建穩定細胞株時，可用病毒感染增強劑和嘌呤霉素（cat#ZNLP-005）對細胞進行感染和篩選。
2、為了您的健康，實驗操作過程盡量在生物安全柜中完成，并做好個人防護，請穿實驗服和帶一次性手套。所有實驗廢棄物均需要進行滅菌處理。
3、小量病毒包裝時，也可以使用小提質粒。轉染時如無opti-MEM，可以用PBS、生理鹽水或無血清DMEM代替。
合肥知恩生物技術有限公司
電話：0551-63822150/86-18949874361
郵箱：zhienbiology@126.com
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